Группа компаний "Униконс"

Продвижение и реализация пищевых добавок, антисептиков и другой продукции НПО Альтернатива.

Перейти на сайт

"Антисептики Септоцил"

Септоцил. Бытовая химия

Септоцил - ваш выбор в борьбе за чистоту

Перейти на сайт

"Петритест"

Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.

Перейти на сайт

4.1. ПРОСТАЯ ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ

Мазок, т. е. каплю эмульсии микроорганиз­мов, помещенную на предметное стекло, высушивают и фиксируют над пламенем горелки. Подготовленный пре­парат заливают 1–2 каплями краски (метиленовой си­нью Леффлера или фуксином Пфейфера), выдерживают 0,5–1 мин и смывают дистиллированной водой.

 

4.2. ОКРАСКА СПОР ДРОЖЖЕЙ

4.2.1. МЕТОД  ВИРТЦА

Фиксированный на пламени препарат залива­ют 5%-ным водным раствором мала­хитового зеленого и 3–4 раза прогревают до появления паров (30–60 с). Окра­ску можно проводить, выдерживая препарат 3–5 мин в растворе малахитового зеленого, подогретого до 80°С. За­тем препарат промывают 30 с в проточной воде и докра­шивают 30 с 0,5%-ным водным раствором сафранина.

Зрелые аскоспоры окрашиваются в сине-зеленый, а вегетативные клетки – в красный цвета.

Аскоспоры дрожжей родов Hansenula, Schizosaccharomyces могут удерживать оба красителя.

 

4.2.2.   КАРБОЛ-ФУКСИНОВАЯ ОКРАСКА

Вариант 1. Фиксированный на пламени препарат за­ливают раствором Циля (10 см3 насыщенного спиртового раствора основного фуксина с 90 см3 5%-ного фенола) и нагре­вают 2–5 мин до появления паров. Затем проводят обесцвечивание препарата, погружая его в 2%-ный рас­твор молочной кислоты или в 95%-ный этанол, содержа­щий 1 мл концентрированной НСl в 100 см3.

Препарат промывают в воде и докрашивают 3–5 мин 1%-ными растворами мети­ленового синего или нильско­го голубого.

Зрелые аскоспоры окрашиваются в красный, вегета­тивные клетки – в синий цвета.

Аскоспоры рода Schizosaccharomyces, а также после набухания аскоспоры дрожжей родов Hansenula и Pichia не обладают кислотоустойчивостью и окрашиваются в си­ний цвет.

 

Вариант 2. Фиксированный препарат окрашивают в течение 2–3 мин карболовым фуксином при подогревании над пламенем горелки, затем краску сливают и препарат обесцвечивают соляной кислотой со спиртом (две части 10%-ного раствора соляной кислоты и одна часть 96%-ного спирта) в течение 30 с, промывают водой и окрашивают в течение 1–2 мин метиленовой синью.

Споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные клетки – в синий.

 

4.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛИКОГЕНА В КЛЕТКАХ ДРОЖЖЕЙ

Гликоген – одно из резервных веществ дрож­жевых клеток. Он накапливается в цито­плазме и окраши­вается раствором Люголя в коричневый или красно-бурый цвет. Наблюдения за содержанием гликогена в клетках дрожжей проводят в динамике развития культуры.

Таблица 4

Содержание гликогена в клетках

Таблица 4

Готовят препарат «раздавленная капля» в растворе Люголя и в нескольких полях зрения подсчитывают об­щее количество клеток и количество клеток, содержащих гликоген. Общее число подсчитанных клеток должно быть не менее 100.

Полученные данные можно регистрировать в предла­гаемой таблице 4.

Если препарат нагреть до 60°С, окраска гликогена ис­чезает, а при охлаждении препарата она вновь восстанав­ливается.

 

4.4. ОКРАСКА ВОЛЮТИНА

4.4.1.   ПО МЕТОДУ ОМЕЛЯНСКОГО

На предметном стекле готовят тонкий мазок из культуры исследуемых дрожжей, высушивают на возду­хе и фиксируют на пламени горелки. Мазок окрашивают карбо­ловым фуксином 30–40 с и промывают водой. Далее мазок дифференцируют, погружая его в склянку с 1%-ным раствором серной кислоты на 20–30 с и немедленно про­мывают водой. Серная кислота обесцвечивает цитоплаз­му, а зерна волютина остаются окрашенными фуксином. Препарат докрашивают метиленовым синим (1:40) 20–30 с, промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют, пользуясь объективом МИ-90.

На препарате зерна волютина окрашены в красный цвет, цитоплазма клетки – в голубой.

 

4.4.2.   ПО МЕТОДУ ЛЕФФЛЕРА

Тонкий фиксированный мазок культуры исследуемых дрожжей окрашивают мети­леновым синим Леффлера в течение 3 мин. Мазок промывают водой, не высушивая, покрывают его покровным стеклом и микроскопируют, пользуясь объективом ВИ-60.

На препарате зерна волютина окрашены в красновато-фиолетовый цвет, цитоплазма – в голубой.

Для более ясной дифференциации зерен волютина под покровное стекло полоской фильтровальной бумаги про­тягивают каплю 1%-ного раствора серной кислоты. При этом зерна волютина сохраняют окраску, а цитоплазма обесцвечивается.

Обратный результат можно получить, добавляя под покровное стекло каплю 5%-ного раствора соды. Волютиновые зерна обесцвечиваются, а цитоплазма клетки сохра­няет голубой цвет.

 

4.5. ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ ПО ГРАМУ

Препарат, фиксированный в пламени горелки или обработанный метиловым спиртом, покрывают рас­твором генцианвиолета на 1–2 мин, затем обра­батывают в течение 1–2 мин раствором Люголя, промывают водой и быстро опускают в 96%-ный этиловый спирт. В спирте препарат держат до тех пор, пока от него не пере­станет отходить краска. После этого препарат вновь промывают водой и окрашивают разбав­ленным фуксином Пфейфера в течение 0,5–1 мин.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грам­отрицательные – в красный.

Метод применяется исключительно для окраски бакте­рий и не эффективен при окрашивании дрожжей, ввиду принципиальных отличий в строении клеточной стенки.

 

4.6. КРАСКИ

Метиленовый синий (насыщенный спиртовой раствор). К 100 см3 96%-ного этилового спирта прибавля­ют 10 г метиленового синего (в порошке) и оставляют сто­ять несколько дней (при этом несколько раз встряхива­ют), затем раствор фильтруют.

 

Метиленовый синий 1:40.

Метиленовый синий

(насыщенный спиртовый раствор) 1 см3

Вода дистиллированная............... 40 см3

 

Метиленовый синий щелочной (синька Леффлера). В 100 см3 дистиллированной воды растворяют 30 см3 на­сыщенного спиртового раствора метиленового синего и 1 см3
1%-ного раствора едкого кали.

 

Разбавленная синька (по Финку). Готовят три раство­ра: 0,09 г фосфорнокислого натрия (N2HPO4) растворяют в 500 см3 дистиллированной воды; 13,6 г фосфорнокисло­го калия (KH2PO4) растворяют в 500 см3 дистиллирован­ной воды; 0,1 г метиленового синего растворяют в 500 см3 дистиллированной воды.

Для приготовления рабочего раствора синьки смешивают 0,25 см3 первого раствора с 99,75 см3 второго и 100 см3 раствора синьки, рН раствора должно быть 4,6.

 

Основной фуксин. 2 г сухой краски и 20 см3 96%-ного этилового спирта встряхивают и оставляют стоять несколь­ко дней, получается насыщенный спиртовой раствор.

 

Карболовый фуксин (по Цилю). 10 см3 насыщенного спиртового раствора основного фуксина растворяют в 100 см3 5%-ного раствора карболовой кислоты (фенола).

 

Разбавленный фуксин (по Пфейферу). Для окраски микроорганизмов применяют раствор разбавленного в 10 раз карболового фуксина.

 

Малахитовый зеленый (водный насыщенный раствор).

Малахитовый зеленый................ 5 г

Дистиллированная вода...... 100 см3

Для окраски спор лучше брать спиртово-водный раствор.

Малахитовый зеленый................ 5 г

Спирт этиловый, 96°............. 20 см3

Дистиллированная вода........ 80 см3

 

Сафранин (водный раствор).

2,5%-ный раствор сафранина
в 96%-ном этаноле ............... 10 см3

Вода дистиллированная...... 100 см3

 

Насыщенный спиртовой раствор генцианвиолета (для окраски по Граму).

1 г сухой краски растворяют в 10 см3 96%-ного спирта и смешивают со 100 см3
5%-ного раство­ра карболовой кислоты; для достижения прозрачности добавляют несколько капель спирта.

 

Растворы йода в йодистом калии (по Люголю).

Раствор Люголя для окраски по Граму. Для приготов­ления раствора Люголя 1 г кристаллического йода расти­рают в фарфоровой ступке с 2 г йодида калия и порциями (по 5 см3) добавляют дистиллированную воду до полного растворения кристаллического йода в йодиде калия. По­сле полного растворения кристаллов объем доводят до 300 см3. Приготовленный раствор Люголя хранят в посу­де из темного стекла (на свету раствор Люголя быстро обес­цвечивается).

Раствор Люголя для выявления гранулезы.

Кристаллический йод.................. 1 г

Йодид калия ................................ 2 г

Дистиллированная вода...... 100 см3

Гранулеза в клетках окрашивается в темно-синий цвет.

Раствор Люголя для выявления гликогена.

Кристаллический йод.................. 7 г

Йодид калия .............................. 20 г

Дистиллированная вода...... 100 см3

Гликоген приобретает красно-бурую окраску.

Техника приготовления растворов для выявления гра­нулезы и гликогена такая же, как раствора Люголя для окраски по Граму.

 

Раствор туши.

Традиционный метод.

Жидкая натуральная тушь.... 10 см3

Дистиллированная вода........ 90 см3

Раствор центрифугируют 15–20 мин. Верхний слой отсасывают (пипеткой), переносят в пробирку и автоклавируют 30 мин при 0,05 МПа (температура 110°С).

Можно раствор туши сразу после смешивания автоклавировать 30 мин при давлении 0,05 МПа. После автоклавирования раствор отстаивают две недели, после чего его можно использовать.

Метод Литтмана.

Черная тушь.......................... 15 см3

Раствор тимерсола
в соотношении 1:1000........... 30 см3

Твин-80.................................. 0,1см3

На черном фоне капсулы видны как светлый ореол во­круг клетки.

loading...
Связаться с нами+7 (8452) 37-67-02
Связаться по e-mailalternativa-sar@yandex.ru
Наш адрес Саратов, Шелковичная 186, 511 оф.

 

яндекс.ћетрика