13.1. УДЕЛЬНАЯ СКОРОСТЬ РОСТА          

Для вычисления удельной скорости роста μ служит уравнение

где Р – начальное содержание дрожжей (засев), кг; А – содержание дрожжей в конце цикла, кг; τ – длительность процесса, ч.

В реальном процессе на удельную скорость роста ока­зывает влияние множество независимых друг от друга факторов: качество питательной среды, конструкция и техническое состояние оборудования, активность засева, колебания температуры, рН среды и концентрации саха­ра, степень аэрации и др. Поэтому для определения реаль­ной удельной скорости роста в конкретных условиях сле­дует проанализировать результаты производственной дея­тельности методами математической статистики, с тем чтобы величины А и Р были достоверными.

13.2. БРОДИЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ

13.2.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПО СКОРОСТИ СПИРТОВОГО БРОЖЕНИЯ

О скорости брожения судят по количеству уг­лекислоты, выделившейся в единицу времени из опреде­ленного объема среды:

С₆H₁₂O₆ (180 г) → 2CO₂ (88 г) + 2CH₃CH₂OH (92 г).

Количество углекислоты устанав­ливают по убыли веса сосуда, снабжен­ного затвором (рис. 35).

В колбы (или бутыли) наливают 11%-ное неохмеленное сусло. Вносят в сусло исследуемую культуру до 7–10 млн клеток в 1 см³. Количество введенных дрожжей определяют под­счетом клеток под микроскопом с по­мощью камеры Горяева. Колбы закры­вают затворами, взвешивают и остав­ляют при температуре 28–30°С или температуре, соответ­ствующей техно­логической. Колбы или бутыли взве­шивают ежедневно до прекращения изменения массы.

Рис. 35

Колба с сернокислым затвором для брожения

По разности начальной и конечной масс определяют бродильную актив­ность дрожжей, выражая ее в граммах диоксида углерода, выделившегося из 100 см³ сусла.

Рассчитывают, сколько граммов СO₂ выделилось из 1000 см³ среды в 1 ч за каждый интервал времени между взвешиваниями сосуда. Для регистрации результатов можно использовать таблицу 19.

Таблица 19

Динамика выделения СО₂ при брожении

Более информативным и технологически верным бу­дет пересчет граммов СO₂, выделившихся из 1000 см³ сре­ды в 1 ч на 1 млн клеток засевных дрожжей.^***

13.2.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПО КОЛИЧЕСТВУ ЭТАНОЛА  

Количество этанола, образовавшегося при бро­жении, определяют оксидиметрическим методом, осно­ванным на окислении этилового спирта до уксусной ки­слоты и воды смесью бихромата калия с серной кислотой:

3СН₃СН₂ОН + 2K₂Cr₂O₇ + 8H₂SO₄ =
= 3СН₃СООН + 2Cr(SO₄)₂ + K₂SO₄ + 11H₂O.

По окончании окисления спирта избыток бихромата оттитровывают раствором соли Мора:

К₂Сг₂O₇ + 6FeSO₄(NH₄)₂SO₄ + 7H₂SO₄ =
= Cr₂(SO₄)₃ + 3Fe₂(SO₄)₂ + 6(NH₄)₂SO₄ + 7H₂O + K₂SO₄.

По количеству бихромата, израсходованного на окис­ление, вычисляют концентрацию спирта. Наиболее точ­ные результаты метод дает при содержании спирта в жид­кости в пределах 1–2%. Поэтому при более высоких кон­центрациях спирта разбавляют культу­ральную жидкость, а при меньших – растворы соли Мора и бихромата.

В мерную колбу на 100 см³ помещают 20 см³ культуральной жидкости, освобожденной от клеток декантаци­ей, фильтрованием или центрифугированием. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой, переме­шивают и берут 10 см³ в круглодонную колбу на 50–75 см³. В трехшариковый приемник наливают 25 см³ раствора бихромата и 10 см³ концентрированной H₂SO₄. Колбу плот­но закрывают резиновой пробкой с отводной трубкой, су­женный конец которой должен доходить почти до дна при­емника (см. рис. 36). Затем в течение 10–15 мин отгоняют две трети содержимого колбы. Раствор бихромата за это время меняет окраску от оранжевой до грязно-бурой. По­сле отгонки во избежание обратного перебрасывания жид­кости из приемника убирают приемник и только потом отставляют горелку.

Содержимое приемника переносят в мерную колбу на 100 см³. Дистиллированной водой споласкивают прием­ник и отводную трубку, и промывные воды выливают в ту же мерную колбу. После этого раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают, отбира­ют из него 20 см³ в коническую колбу на 250 см³, добавля­ют 20 см³ дистиллированной воды и титруют солью Мора.

Рис. 36
Прибор Мартена для определения спирта:

1 – круглодонная колба;
2 – отводная трубка;
3 – приемник

Параллельно ведут контрольное титрование, чтобы опре­делить, сколько соли Мора идет на титрование 5 см³ рас­твора бихромата. Для этого в коническую колбу помеща­ют 5 см³ раствора бихромата, 2 см³ концентрированной серной кислоты, 30–40 см³ дистилли­рованной воды и тит­руют солью Мора. Так как соль Мора нестойкое соедине­ние, кон­трольное титрование обязательно делают при ка­ждом определении. Конец титрования устанавливают ка­пельной пробой с раствором феррицианида. Для этого на чистую белую фарфоровую или керамическую пластинку стеклянной палочкой наносят каплю титру­емой жидко­сти и рядом из капельницы – каплю раствора феррициа­нида. Интенсивное синее окрашивание, получаемое при слиянии капель, указывает на конец реакции. Опытный раствор и контроль титруют по два раза. Первое титрова­ние служит для получения ориентировочных результатов, поэтому реакцию титруемой жидкости с раствором фер­рицианида проводят после добавления каждого миллилитра раствора соли Мора. При втором титровании из бюрет­ки сначала сливают без пробы на индикатор большую часть того количества раствора соли Мора, которое было опре­делено первым титрованием, а затем делают качествен­ную реакцию каждый раз после добавления 0,1 см³ рас­твора соли Мора.

Количество этанола (г/10 см³) в культуральной жид­кости рассчитывают по формуле

где а – см³ раствора соли Мора, пошедшие на титрование контроля; б – см³ раствора соли Мора, пошедшие на тит­рование опыта; 25 – см³ К₂Сг₂O₇; 5 – разведение культуральной жидкости (20 см³ до 100 см³); 0,01 – грамм эта­нола соответствует 1 см³ К₂Сг₂O₇.

13.2.3. ОБЪЕМНЫЙ СПОСОБ

Метод основан на том, что состав сусла не всегда оди­наков, и определение бродильной энергии дрожжей целе­сообразнее проверять на растворе какого-либо сахара. Прибор, применяемый для этой цели, состоит из колбоч­ки емкостью 50 см³, присоединенной резиновой трубки, бюретки и уравнительного сосуда. Бюретку и уравнитель­ный сосуд заполняют 20%-ным раствором NaCl, подкис­ленным ортофосфорной кислотой до рН 1,0. Этот раствор почти не поглощает СO₂. В колбочку помещают трехсуточ­ную культуру дрожжей (выращенных на сусло-агаре), про­мытых и отпрессованных между листками фильтроваль­ной бумаги. В навеске должно содержаться около 0,15 г сухих веществ (определенный вес, например 0,7 г с влаж­ностью около 75%). Затем в колбочку наливают 30 см³ 10%-ного раствора сахара (глюкозы), содержащего 0,2% КН₂РO₄. Колбочку закрывают пробкой и из бюретки вы­тесняют воздух, пользуясь уравнительным сосудом. Уро­вень раствора в бюретке устанавливают на ноль. После это­го поворотом трехходового крана соединяют емкость кол­бочки с бюреткой и начинают процесс брожения, который ведут при температуре 20°С в течение 3 ч. Через каждый час уровень жидкости в бюретке отмечают и устанавлива­ют на ноль.

По объему образовавшегося СO₂ за 3 ч (по сумме трех объемов) судят о бродильной способности дрожжей. Хо­рошо бродящие дрожжи за 3 ч образуют около 30 см³ СO₂.

13.2.4. МАНОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БРОДИЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ^***

Для определения бродильной активности дрожжей используется прибор, состоящий из колбы (объем 300–500 см³), газоотводной трубки с краном и чувствительно­го манометра (медицинский, для определения артериаль­ного давления) (рис. 37).

Перед началом работы измеряют объем используемой колбы до нижнего края тщательно притертой пробки и объем газоотводной трубки. Для этого заполняют колбу и трубку водой, затем мерным цилиндром измеряют объем вместившейся жидкости.

Воспользовавшись уравнением Менделеева – Клапей­рона, определяют необходимую величину давления в сво­бодном объеме используемой колбы. Порядок расчета ве­личины давления описан в пп. 12.4.2.

В колбу вносят 0,7 г отпрессованных на воронке дрож­жей, 30 см³ солодового сусла
(8–10% СВ) или 10%-ного раствора сахара и взбалтывают до получения однородной суспензии. Колбу тщательно закрывают и через газоот­водную трубку соединяют с манометром. Для уравнивания давления в колбе с атмосферным давлением извлекают подвижную часть краника и сразу помещают на место, тща­тельно притерев и совместив отверстия. Подготовленный таким образом прибор переносят в термостат при темпера­туре, соответствующей технологической, и регистрируют время, за которое стрелка манометра достигнет необходи­мой отметки, соответствующей определяемому количест­ву выделенного диоксида углерода.

Рис. 37
Прибор для брожения:

1 – колба; 2 – газо­отводная трубка; 3 – кра­ник; 4 – мано­метр;
5 – подвижная часть кра­ни­ка; 6– пробка; 7 – дрожже­вая суспензия.

П р и м е р. Для оценки бродильной активности пив­ных и винных дрожжей регистрируется 28–30 см³ СO₂. Такое количество газа хорошими дрожжами выделяется не более чем за 3 ч.

13.3. СТЕПЕНЬ СБРАЖИВАНИЯ^***

Конечная степень сбраживания является не толь­ко важным показателем техно­логической оценки углевод­ного состава сусла, но и характеризует физиологические возможности исследуемых дрожжей, имеющие решающее значение в оптимизации технологического процесса.

Метод основан на экспериментальном сбраживании дрожжами субстрата с после­дующим установлением ко­личества сброженных сахаров.

В зависимости от поставленной задачи и особенностей исследуемой расы дрожжей начальная концентрация СВ в субстрате может колебаться от 15 до 20 и более %.

Для того чтобы исключить влияние состава сусла на результаты эксперимента, можно использовать среду по­стоянного состава.

Глюкоза
(сахароза, мальтоза)............................... 150–200 г

Дрожжевой автолизат................................. 5,0 см³

Биотин....................................................... 0,02 см³

Вода................................................. до 1000,0 см³

Приготовленный субстрат разлить в бутылки по 200 см³ и туда же внести по 0,5 г отпрессованных на воронке ис­следуемых дрожжей. Тщательно перемешать до однород­ной суспензии и инкубировать. На каждую культуру го­товить по 10 бутылок и определять степень сбраживания с интервалом 6–12–24 и более часа.

Температурный режим инкубации может быть опти­мальным для дрожжей — 28–30°С или же устанавливать­ся в зависимости от технологических особенностей.

Измерение вести до трех одинаковых результатов, пер­вый из которых считать конечной степенью сбраживания. Перед измерением плотности субстрат фильтровать через бумажный фильтр, возвращая в воронку первые порции.

Конечную степень сбраживания, показывающую ко­личество в сусле сброженных веществ, считают в процен­тах к их массе в исходном субстрате по формуле

где т_св – массовая доля сухих веществ в начальном суб­страте, %; m_св1 – видимая массовая доля сухих веществ в субстрате на момент измерения, %. Регистрируется:

• конечная степень сбраживания;
• скорость сбраживания;
• динамика сбраживания, выраженная графически.

13.4. ПОДЪЕМНАЯ СИЛА

Подъемная сила – основной показатель каче­ства хлебопекарных дрожжей; чем быстрее дрожжи под­нимают тесто, тем выше их качество. Хорошие дрожжи поднимают тесто за 60–65 мин. В соответствии с требова­ниями стандарта подъемная сила товарных дрожжей не должна превышать 75 мин.

Следует помнить, что подъемная сила дрожжей может несколько изменяться в зависимости от влажности и ка­чества муки.

13.4.1. ПОДЪЕМНАЯ СИЛА ПРЕССОВАННЫХ ДРОЖЖЕЙ

Стандартный метод. 280 г пшеничной муки 85%-ного помола помещают в термостат при температуре 35°С не ме­нее чем на 2 ч. Затем подогревают до 35°С 160 см³ 2,5%-ного раствора поваренной соли, 5 г анализируемых прессованных дрожжей, отвешенных на технических весах с точно­стью до 0,01 г, смешивают в фарфоровой чашке с 15–20 см³ подготовленного, как указано выше, раствора поваренной соли до исчезновения комков. Разведенные дрожжи быст­ро вливают в дежу лабораторной тестомесильной машины с частотой вращения 135 об/мин. Оставшимся раствором соли ополаскивают чашку из-под дрожжей и тоже выли­вают в дежу. Затем насыпают 280 г согретой муки и вклю­чают тестомесильную машину.

Через 5 мин тестомесильную машину останавливают, вынимают тесто, придают ему форму батона и кладут в металлическую форму, также предварительно нагретую в термостате при 35°С и смазанную растительным маслом.

При отсутствии месильной машины тесто замешива­ют вручную, соблюдая указанный выше режим его приго­товления.

Форма должна иметь в продольном и поперечном раз­резах трапецию следующих внутренних размеров (в см): верхние основания 14,3×9,2, нижние – 12,6×8,5, высо­та – 8,5. На длинные борта ее навешивают поперечную металлическую перекладину, входящую в форму на 1,5 см (рис. 38).

Пробу ставят в термостат с температурой 35°С и фик­сируют время. Когда тесто коснется нижнего края пере­кладины, вновь отмечают время.

Рис. 38
Форма для определения подъемной силы дрожжей

Скоростью подъема теста, или подъемной силой, счи­тают продолжительность (в мин) нахождения теста в фор­ме с момента внесения его до соприкосновения с нижним краем перекладины.

Хорошие дрожжи показывают подъемную силу не бо­лее 60–65 мин.

«По шарику». Навеску дрожжей массой 0,31 г пере­мешать в ступке с 4,8 см³ подо­гретой до 35°С воды. Доба­вить 7,0 г муки II сорта и быстро замешать, придав замесу форму шарика, не прилипающего к рукам. Шарик погру­зить в стакан с водой темпе­ратурой 32°С. Стакан помес­тить в термостат при 32°С.

Регистрировать время от погружения до всплытия шарика.

Хорошие дрожжи показывают подъемную силу не бо­лее 25 мин.

Время, затраченное на всплывание шарика (мин), ум­ножают на коэффициент 3,5 и получают величину подъ­емной силы, определяемую стандартным способом.

13.4.2. ПОДЪЕМНАЯ СИЛА СУХИХ ДРОЖЖЕЙ

К навеске сушеных дрожжей (2,5 г), взятой на техни­ческих весах, добавляют 30 см³ водопроводной воды, на­гретой до 35°С. Смесь помещают в термостат при темпера­туре 35°С на 30 мин. К размокшим дрожжам добавляют 15 г пшеничной муки II сорта, тщательно размешивают и вновь ставят в термостат на 2 ч. Одновременно в термо­стат помещают 265 г муки того же сорта, 130 см³ воды, в которой растворено 4 г поваренной соли, и стандартную форму (см. рис. 38), смазанную растительным маслом. Через 2 ч смесь дрожжей, воды и муки переводят в дежу лабораторной тестомесильной машины (или большую фар­форовую чашку), смывая остатки смеси 130 см³ солевого раствора, после чего засыпают 265 г согретой муки. Тесто замешивают в течение 5 мин с момента внесения дрож­жей, затем переносят его в форму и далее поступают так же, как при определении подъемной силы прессованных дрожжей.

13.5. СУЛЬФИТОСТОЙКОСТЬ ВИННЫХ ДРОЖЖЕЙ

Способ 1. Для сравнительного изучения сульфитостойкости различных культур дрожжей их нужно подвергнуть действию одинаковой дозы свободной SO₂. Сульфито­стойкие расы можно отбирать по скорости забраживания виноградного сусла, содержа­щего 100 мг/дм³ свободной SO₂ в момент внесения в сусло разводок изучае­мых культур.

Вначале проводят пробную сульфитацию сусла разны­ми дозами SO₂ и выбирают такую, при которой через час после внесения SO₂ в сусло в нем будет содержаться около 100 мг/дм³ свободной сернистой кислоты. Сразу после сульфитации содержание ее быстро уменьшается, так как она вступает в соединение с составными частями сусла (са-харами, альдегидами и др.), а спустя 1–2 ч ее количество уже заметно не меняется. Затем сульфитируют сусло вы­бранной дозой SO₂ в склянке вместимостью 2000 см³ с ниж­ним тубусом, склянку закрывают, сусло перемешивают и оставляют на час.

За это время в стерильные небольшого объема склян­ки, размеченные до стерилизации по 20 см³, вносят по 0,2 см³ двухсуточных разводок исследуемых рас дрожжей. Каждую культуру вносят в три склянки, т. е. опыты ста­вят в трех повторениях.

Через час после сульфитации сусло из 2-литровой склян­ки разливают через нижний тубус по 20 см³ в склянки быстро, но осторожно, чтобы оно не разбрызгивалось. Для предотвращения улетучивания SO₂ склянки закрывают резиновыми пробками, обработанными спиртом, и затем ставят в термостат при температуре 27°С. При такой по­становке опыта все культуры дрожжей подвергаются дей­ствию одинаковой дозы свободной SO₂. Ежедневно в тече­ние 10 дней опытные склянки просматривают и отбирают сульфитостойкие расы дрожжей по скорости размноже­ния и забраживания сусла.

Способ 2. Быстрее и проще можно определять сульфитостойкость по скорости размножения штаммов дрожжей на сульфитированном виноградном сусло-агаре в чашках Петри. Сусло перед розливом в чашки Петри смешивают с равным количеством 3%-ного водного агара. В связи с невозможностью определять содержание сернистой кислоты в сусло-агаре для подбора дозы сульфитации виноградное сусло в нескольких контрольных порциях смешивают с таким же количеством водопроводной воды (вместо 3%-ного вод­ного агара). Разбавленное сусло в склянках сульфитируют несколькими дозами крепкого водного раствора сернистой кислоты для того, чтобы можно было выбрать дозу суль­фитации, при которой через час после внесения SO₂ в сусле, а также в сусло-агаре будет содержаться около 100 мг/дм³ свободной сернистой кислоты. Содержание свободной сернистой кислоты определяют йодометрическим методом.

Штаммы исследуемых дрожжей предварительно выра­щивают в течение 2 суток в виноградном сусле при темпе­ратуре 27°С, а затем уколом иглы наносят на поверхность сульфитированного сусло-агара в количестве 25 штаммов на чашку. Кончик иглы для этого погружают в разводки исследуемых культур примерно на 1 см. Чашки Петри с посевами помещают в термостат и выдерживают при тем­пературе 27°С. Ежедневно в течение недели просматрива­ют чашки Петри и отбирают сульфитостойкие штаммы, колонии которых вырастают раньше.

Первичный отбор проводится при содержании свобод­ной сернистой кислоты 100 мг/дм³, а затем наиболее сульфитостойкие штаммы отбирают при содержании ее 150 мг/дм³.

Для получения более объективной информации сле­дует использовать микроско­пические методы оценки со­стояния исследуемых культур дрожжей.

13.6. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ КУЛЬТУРЫ. АВТОЛИЗНОЕ ЧИСЛО^***

Для оценки степени устойчивости дрожжевой культуры к неблагоприятным факторам питательной сре­ды может использоваться тест для определения техноло­гической стойкости дрожжей – автолизное число.

Тест основан на определении количественной разни­цы в среде аминно-аммонийного азота между двумя изме­рениями с учетом прироста клеточной массы. Ввиду того, что стадии разбраживания и активного брожения (лаг-фаза Þ фаза логарифмического роста) сопровождаются активным приростом пока еще здоровой клеточной мас­сы, а значит, активным потреблением доступного азота, измерения следует начинать по завершении стадии актив­ного брожения – при переходе культуры в стационарную фазу Þ фазу затухания Þ гибели. Интервал между изме­рениями может быть выбран произвольно в течение всего периода брожения.

Суть предлагаемого теста видна из формулы

где А – автолизное число; N₁ – количество усвояемого азота начальное; N₂ – количество усвояемого азота ко­нечное; K₁ – концентрация дрожжей начальная; К₂ – концентрация дрожжей конечная.

Таким образом, автолизное число выражает увеличе­ние/уменьшение количества аминно-аммонийного азота в среде на 10 млн/см³ клеток дрожжей между двумя изме­рениями.

Полученные результаты могут регистрироваться на графике, отображающем время брожения и величину автолизного числа.

Избыточное увеличение аминно-аммонийного азота, или высокий показатель авто­лизного числа, может сви­детельствовать о высокой интенсивности автолизных про­цессов и, как следствие, слабости или дефектности оче­редной генерации или культуры вообще.

Вместе с тем, чем больше автолизное число, тем боль­ше биомасса подвержена воздействию неблагоприятных факторов среды с точки зрения ее физико-химических параметров.

Тест и более информативен, и более объективен, нежели простой подсчет процентного соотношения живых и мертвых клеток, который на сегодняшний день в производ­ственных лабораториях является единственным кри­терием оценки жизне­способности культуры. Данный ана­лиз позволяет не только констатировать факт гибели клет­ки, но и оценить степень ее деструктивных изменений, учесть весь массив факторов, воздейству­ющих на дрож­жевую клеточную массу в процессе брожения, с учетом технологических особенностей конкретного предприятия.

Изменяя те или иные параметры брожения по показа­телю автолизного числа, можно определить жизнеспособ­ность клеточной популяции в конкретных физико-хими­ческих условиях среды.

13.6.1. ФОРМОЛЬНОЕ ЧИСЛО

Усвояемый азот в среде определяется формольным тит­рованием. Сущность метода заключается в том, что фор­малин реагирует с аминогруппами большинства амино­кислот и вытесняет серную кислоту из аммонийных со­единений. Образующиеся метиленамино­группы и серная кислота оттитровываются щелочью.

Способ 1. 10 см³ среды через бумажный фильтр от­фильтровывают от дробины и дрожжей, разбавляют дис­тиллированной водой до 100 см³ и титруют 0,1 Н раство­ром NaOH с фенолфталеином до слаборозового окрашива­ния. Затем туда же вносят 5,0 см³ нейтрального формалина и вторично титруют тем же раствором NaOH до слаборозо­вого окрашивания.

Количество миллилитров 0,1 Н NаОН, пошедшее на вторичное титрование, называют формольным числом ис­следуемой жидкости, оно является величиной относи­тельной.

Чтобы выразить формольное число в абсолютных ве­личинах растворенного в среде аминного и аммонийного азота, нужно формольное число умножить на коэффици­ент 0,0014, т. е. 1 см³ 1 Н раствора NаОН соответствует 0,014 г азота в 1000 см³ среды.

Способ 2. В стакане взвешивают 25±0,01 г питательной среды, и навеску теплой дистиллированной водой, осво­божденной кипячением от СO₂, переводят в мерную колбу  на 100 см³.

Раствор охлаждают до 20°С, доводят водой до метки и перемешивают.

В химический стакан отбирают пипеткой 20 см³ полу­ченного раствора и титруют 0,1 Н раствором щелочи до рН = 7,0. Затем сюда же приливают 5 см³ формольной сме­си и продолжают титрование до рН = 9,1.

Для контрольного титрования в химический стакан отмеривают 20 см³ дистилли­рованной воды и 5 см³ фор­мольной смеси и также титруют до рН = 9,1.

Содержание аминно-аммонийного азота рассчитыва­ют по формуле

N =  0,0014 · (а - б) ·100 : Н,

где N – усвояемый азот (%); a – объем 0,1 Н щелочи, по­шедшей на титрование 20 см³ раствора питательной среды (см3); б – то же, на титрование контрольной пробы (см³);
Н – навеска питательной среды в 20 см³ раствора (г).

Например, N = 0,0014 · (11,2 - 0,2) · 100 : 5 = 0,31%

Формольная смесь.

Формалин, х. ч...................................... 50,0 см3

Фенолфталеин, 1%................................ 1,0 см3

Оттитровать 0,1 Н NаОН до слаборозового окраши­вания.

Пригодна в течение 2–3 дней.