5 Разбавители и дезинфицирующие средства
5.1 Разбавители
5.1.1 Общие положения
Разбавитель, используемый для пропитывания всех видов тампонов (тампонов для обуви, палочковых тампонов и т. д.):
- раствор пептонный солевой, приготовленный по ISO 6887-1;
- вода буферная пептонная, приготовленная по ISO 6887-1:
- вода стерильная;
- питьевая вода для проб при условии, что ее испытание не повлияет на проведение анализа, пригодная, например, для тампонов для обуви.
5.1.2 Транспортные среды
Основная задача данных сред – обеспечение выживания искомой популяции микроорганизмов. Например, Campylobacler особо чувствительны к высушиванию. Примеры транспортных сред:
- вода буферная пептонная, предназначенная для Salmonella, приготовленная по ISO 6887- 1;
- среда транспортная Cary-Blair или аналогичная;
- среда транспортная Amies с активированным углем или аналогичная.
В том случае, когда пробы имеют выраженную кислотность или щелочность, либо приобретают данное свойство в процессе транспортирования, допускается применение буферного разбавителя.
При проведении подсчета микроорганизмов необходимо учитывать возможность размножения целевых или конкурирующих микроорганизмов.
5.2 Дезинфицирующие средства для обеззараживания упаковки, инструментов и поверхности проб
5.2.1 Этанол, объемной долей 70 %.
5.2.2 Салфетки влажные, пропитанные спиртом.
5.3 Нейтрализующие средства для удаления остатков дезинфицирующих средств
5.3.1 Общие положения
Поскольку каждое дезинфицирующее средство эффективно нейтрализуется конкретным химическим реагентом (см. таблицу 1), не существует нейтрализующего средства, пригодного для всех случаев применения. Вместе с тем, если предполагают использование дезинфицирующего средства, состав которого не известен, используют нейтрализующее средство общего применения (см. 5.3.2).
Таблица 1. Компоненты нейтрализующих средств и нейтрализуемые вещества
5.3.2 Нейтрализующее средство общего применения
5.3.2.1 Состав:
- соевый лецитин – 3,0 г;
- сорбитан моноолеат (полисорбат 80) – 30,0 г;
- L-Гистидин -1,0 г;
- натрий тиосульфат (Na2S2O3 ∙ 5H2O) – 7,8 г,
- динатрий фосфат (Na2HPO4 ∙ 12Н2О) – 100,8 г,
- вода – 1000 см3.
5.3.2.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде при нагревании. Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при температуре 121 °С. Готовую среду хранят при температуре (5 ± 3) °С в течение 3 мес в герметичном, защищенном от света контейнере.
Данную нейтрализующую жидкость, как правило, добавляют в разбавитель (5.1) в количестве 10% (по объему).
6 Оборудование и материалы
6.1 Оборудование и средства для отбора проб (включая описание)
6.1.1 Общие положения
Многоразовое оборудование для отбора проб стерилизуют перед использованием, например влажным жаром (в автоклаве) или сухим теплом (в сушильном шкафу), в соответствии с ISO 7218. В некоторых случаях может потребоваться химическое обеззараживание. После данной обработки оборудование становится чистым, стерильным и не содержит ингибирующих веществ. В том случае, когда при отборе проб оборудование предполагается использовать повторно, стерилизацию предпочтительно проводить фламбированием (см. 6.1.10), этанолом объемной долей 70 %, либо любым другим подходящим дезинфицирующим средством (см. ISO 7218). При отборе проб продукции на начальной стадии производства требуются запечатанные контейнеры, содержащие различные одноразовые полимерные средства (например, перчатки, бахилы, пластиковые мешки). Используют новый контейнер при каждой новой процедуре отбора проб (например, для каждой отдельной фермы). При отборе проб предпринимают все меры предосторожности с целью недопущения загрязнения неиспользованного одноразового оборудования (или материалов).
6.1.2 Перчатки: одноразовые, водонепроницаемые, используемые при отборе проб, обеспечивающие защиту персонала, проводящего отбор проб, и предотвращающие перекрестное загрязнение. В качество альтернативы используют пластиковые мешки, вывернутые наизнанку и надетые на руку(и).
6.1.3 Бахилы: прочные чистые пластиковые мешки подходящего размера или пластиковые чехлы, имеющие форму ботинка, специально предназначенные для надевания на обувь. Бахилы используют со следующими целями: в качестве биозащиты при посещении фермы для предотвращения загрязнения, для использования при отборе проб тампонами для обуви (6.1.6).
6.1.4 Тканевые тампоны: как правило, большие стерильные куски ткани, такой как марля, целлюлозная губка, тканый и нетканый текстильный материал. Используют для взятия пробы с больших площадей поверхности.
6.1.5 Палочковые тампоны: тампоны из хлопка и все виды тампонов, содержащие малые куски хлопка или синтетического материала, закрепленные на конце деревянной, металлической или пластиковой папочки. Данные тампоны часто хранят в стерильных пробирках, которые могут содержать определенную среду, например транспортную среду Amies с активированным углем. Используемые материалы не должны содержать ингибирующих веществ, если только это не требуется для целевого выделения конкретного микроорганизма.
6.1.6 Тампоны для обуви (для подошвы обуви): приспособления из тканевого тампона, предназначенные для ношения поверх обуви для того, чтобы лицо, проводящее отбор проб, могло отбирать пробы, передвигаясь по зоне отбора проб и занимаясь другой деятельностью. Тампоны для обуви должны обладать достаточной способностью поглощать влагу. Они могут быть изготовлены из трубчатого эластичного материала, используемого для перевязки, который нарезают на куски подходящей длины и надевают на обувь. В качестве альтернативы используют имеющиеся в продаже тканевые бахилы (за исключением бахил с пластиковой подошвой) либо иной подходящий и стерильный материал, который покрывает подошву ноги – например, стерильные тканевые чепцы. В целях предотвращения возможного загрязнения, источником которого является обувь лица, проводящего отбор проб, после входа в зону отбора проб тампоны для обуви надевают на новые пластиковые бахилы (6.1.3).
6.1.7 Тампоны для протирки (используют главным образом в птицеводстве): комплект, состоящий из четырех больших увлажненных кусков ткани (например, впитывающие подушечки, не содержащие противомикробных веществ), прикрепленных к палке, которой проводят по подстилке, щелевым поверхностям или углублениям, содержащим экскременты. Допускается также применение малых губчатых тампонов для протирки, однако их рабочая поверхность ограничена по сравнению с обычными тампонами.
6.1.8 Тампоны Moore: обычно представляют собой составные тканевые тампоны из нескольких слоев марли или ваты, вшитой в марлю. Часто используют гигиенические полотенца (не содержащие противомикробных веществ). Также используют большие целлюлозные губки.
6.1.9 Тампоны из веревки: комплект мягких, стерильных пеньковых веревок диаметром 1-2 мм (например, семь веревок на большой загон для кормления скота), помещенных горизонтально непосредственно над кормушками и корытами с водой, чтобы скот, содержащийся в загоне, их задевал и имел возможность жевать веревки.
6.1.10 Горелка переносная газовая или лампа паяльная.
6.1.11 Пинцеты стерильные, скальпели, ножницы.
6.1.12 Ножницы или шпатели стерильные.
6.1.13 Щетки жесткие стерильные.
6.1.14 Сумка-холодильник с теплоизоляцией, имеющая встроенную систему охлаждения, или термостатическая сумка, способные обеспечить сохранение проб при пониженной температуре (не ниже 0 °С) в процессе транспортирования в лабораторию.
6.2 Контейнеры для проб
Материалы и конструкция контейнеров для проб и крышек должны обеспечивать сохранность пробы и препятствовать ее изменению, что могло бы повлиять на результаты последующих анализов. Контейнеры представляют собой пластиковые мешки или жесткие емкости (пластиковые или стеклянные бутылки или банки с завинчивающимися крышками). Контейнеры и крышки должны быть сухими, чистыми, герметичными и стерильными.
Форма и вместимость контейнеров должны соответствовать конкретным требованиям к продукту, отбор проб которого проводят. Контейнеры (кроме пластиковых мешков) должны надежно закрываться при помощи подходящих пробок или крышек.
