Стерилизация — это обеспложивание, т. е. полное освобождение объектов внешней среды от микроорганизмов.

Стерилизацию проводят различными способами: физическими (воздействие высокой температуры, ультрафиолетовых лучей, использование бактериальных фильтров); химическими (использование различных антисептиков для консервирования питательных сред); биологическими (применение антибиотиков).

Целесообразность использования того или иного способов стерилизации обусловлена особенностями материала, подлежащего стерилизации, его физическими и химическими свойствами.

В лабораторной практике обычно применяют физические способы стерилизации.

Прокаливание в пламени горелки или спиртовки (фламбирование) — способ стерилизации, при котором происходит полное обеспложивание объекта, гак как погибают не только вегетативные клетки, но и споры микроорганизмов. Обычно прокаливают бактериологические петли, шпатели, предметные и покровные стекла, мелкие инструменты.

Стерилизацию сухим жаром проводят в сушильных шкафах (стерилизаторах), представляющих собой термостат с электрическим обогревом, в котором автоматически на заданием уровне может поддерживаться высокая температура. Этим способом стерилизуют лабораторную посуду, предварительно тщательно вымытую, высушенную и плотно завернутую в бумагу.

Стерильность сухим паром при 160-165 °С обеспечивается не менее чем за 90 мин, при 180 °С — не менее чем за 30 мин.

Жидкости (питательные среды, физиологический раствор и др.), предметы из резины и синтетических материалов стерилизовать сухим жаром нельзя, так как жидкости выкипают и выливаются, а резина и синтетические материалы разрушаются. Питательные среды и другие жидкости стерилизуют нагревом в парах воды.

Стерилизация паром может проводиться паром под давлением и текучим паром. Чаще применяют первый способ.

Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Способ основан на воздействии на стерилизуемые материалы насыщенного водяного пара под давлением, выше атмосферного. В результате такой обработки погибают вегетативные и споровые формы микроорганизмов.

Автоклав представляет собой двухстенный массивный котел, снаружи обшитый металлическим кожухом, с герметически закрывающейся крышкой, которая плотно прижимается к котлу откидывающимися болтами с барашками. За счет кипения воды и герметизации в автоклаве создается повышенное давление, позволяющее поднять температуру выше 100 °С.

Каждому значению избыточного давления чистого водяного пара, которое фиксируется манометром, устанавливаемым на автоклаве, соответствует определенная температура кипения воды (табл. 5).

В автоклавах обрабатывают питательные среды, физиологический раствор, воду, лабораторные приборы и мелкое оборудование, имеющее резиновые детали, и др.

Температура и длительность автоклавирования питательных сред определяются их составом. Например, простые среды (мясопептонный агар, мясопептонный бульон) стерилизуют 20 мин при 120 °С. Однако при этой температуре нельзя стерилизовать среды, содержащие нативные белки, углеводы и другие легко изменяющиеся от нагревания вещества. Среды, имеющие углеводы, стерилизуют в автоклаве при температуре 112°С в течение 10-15 мин или дробно при 100 °С в кипятильнике Коха.

Различные жидкости, приборы, имеющие резиновые шланги, пробки, бактериологические фильтры и т. д. стерилизуют 20 мин при температуре 120 °С.

В автоклавах обезвреживают также инфицированный материал. Чашки и пробирки, содержащие культуры микробов, помещают в специальные металлические ведра или баки с отверстиями в крышке для проникновения пара и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С в течение часа. Таким же образом стерилизуют инструменты после работы с бактериями, образующими споры.

К работе с автоклавом допускаются специально подготовленные люди, которые должны строго и точно выполнять правила, указанные в инструкции, прилагаемой к аппарату.

Различные питательные среды и другие материалы для заготовки впрок разливают в пробирки, колбы и закрывают ватными пробками. После обработки в автоклаве они хранятся длительное время, не подвергаясь порче, и используются по мере надобности.

В лабораторной практике для получения эффекта стерильности при температуре, не превышающей 100 °С, иногда пользуются кипятильником Коха. Это металлический цилиндрический сосуд, на дно которого наливается вода; над водой, на решете, помещают стерилизуемые предметы. При кипячении воды все предметы оказываются в атмосфере пара (при температуре 100 °С), вытекающего через неплотно закрывающуюся крышку, отчего и возникло выражение «стерилизация текучим паром».

Однократное прогревание текучим паром в течение часа не приводит к гибели споровых микробов. Достичь этого можно, прибегнув к двукратному повторному нагреванию, которое проводят с интервалом 24 ч по часу. Это так называемая дробная стерилизация.

Учитывая, что температура может существенно влиять на развитие психрофилов, мезофилов, термофилов, при выращивании каждой группы следует создавать необходимые температурные условия; их поддерживают в термостатах — лабораторных шкафах с двойными стенками, теплонагревательным элементом и терморегулятором.