К культуральным, или макроморфологическим, свойствам относятся характерные особенности роста мик­роорганизмов на плотных и жидких питательных средах. При изучении культуральных свойств дрожжей и дрожжеподобных грибов вполне применимы термины и опре­деления, используемые в бактериологии для характери­стики особенностей бактериального роста.

7.1. РОСТ НА ПЛОТНЫХ СРЕДАХ

На поверхности плотных питательных сред в зависимости от посева микроорганизмы могут расти в виде колонии, штриха или сплошного газона.

Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросшее в большин­стве случаев из одной клетки.

В зависимости от того, где развивались клетки (на по­верхности плотной питательной среды, в толще ее или на дне сосуда), различают поверхностные, глубинные и дон­ные колонии.

Образование поверхностных колоний – наиболее су­щественная особенность роста многих микроорганизмов, в том числе и дрожжей, на плотном субстрате (рис. 17–18). Такие колонии отличаются большим разнообразием.

Рис. 17

Форма колонии:

1 – круглая; 2 – круглая с фестончатым краен; 3 – круглая с валиком по краю; 4, 5 – ризоидные;
6 – с ризоидным краем; 7 – амебовидная; 8 – нитевидная; 9 – складчатая; 10 – неправильная;
11 – концентрическая; 12 – сложная.

Рис. 18

Профиль колонии:

1 – изогнутый; 2 – кратерообразный; 3 – бугристый; 4 – врастающий в суб­страт; 5 – плоский;
6 – выпуклый; 7 – каплевидный; 8 – конусовидный.

При их описании учитывают следующие признаки:

• форма – округлая, амебовидная, неправильная, ризоидная и т. д.;
• размер (диаметр) – измеряют в миллиметрах; если размеры колонии не превышают 1 мм, то их называют точечными;
• поверхность – гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кру­гами или радиально исчерченная;
• профиль – плоский, выпуклый, кратерообразный, ко­нусовидный и т. д.;
• блеск и прозрачность – колония блестящая, матовая, тусклая, мучнистая, прозрач­ная;
• цвет – бесцветная (грязно-белые колонии относят к бесцветным) или пигмен­тиро­ванная – белая, желтая, золотистая, оранжевая, сиреневая, красная, черная и т. д.; особо отмечают выделение пигмента в субстрат;
• край – ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый ит. д.;
• структура – однородная, мелко- или крупнозерни­стая, струйчатая и т. д.; край и структуру колонии оп­ределяют с помощью лупы или при малом увеличении микроскопа. Для этого чашку Петри помещают на сто­лик микроскопа крышкой вниз;
• консистенция – определяется прикосновением к по­верхности колонии петлей; может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, слизистой (прилипает к петле), тягучей, иметь вид пленки (снимается целиком), быть хрупкой (легко ло­мается при прикосновении петлей).

Глубинные колонии, напротив, довольно однообраз­ны. Они по виду могут быть похожи на более или менее сплющенные чечевички, в проекции имеющие форму овалов с заостренными концами. Некоторые глубинные колонии напоминают пучки ваты с нитевидными вырос­тами в питательную среду. Образование глубинных ко­лоний часто сопровождается разрывом плотной среды, если микроорганизмы выделяют углекислоту или дру­гие газы.

Донные колонии разных микроорганизмов обычно име­ют вид тонких прозрачных пленок, стелющихся по дну.

Размеры и многие другие особенности колонии могут изменяться с возрастом и зависят от состава среды. По­этому при их описании указывают возраст культуры, со­став среды и температуру культивирования.

При оцисании роста микроорганизмов по штриху (см. рис. 19) отмечают следующие особенности: скудный, умеренный или обильный, сплошной с ровным или волни­стым краем, четковидный, напоминающий цепочки изо­лированных колоний, диффузный, перистый, древовидный или ризоидный. Характеризуют оптические свойства на­лета, его цвет, поверхность и консистенцию.

Рис. 19

Рост по штриху:

1 – сплошной с ров­ным краем; 2 – сплош­ной с волнистым кра­ем; 3 – четковидный; 4 – диффузный; 5 – перистый; 6 – ризоидный.

Определение культуральных признаков дрожжей при росте на плотных средах сводится к описанию штриха изо­лированной или гигантской колонии.

Культуры по консистенции бывают чаще всего пасто­образными, а также слизистыми, почти полностью сте­кающими на дно пробирки, вязкими и клейкими, плот­ными густыми, кожистыми или крошащимися.

Слизистым ростом характеризуются в основном Lipomyces, Cryptococcus и некоторые виды Hansenula со шляповидыыми спорами, тогда как для видов, образующих истинный и ложный мицелий, например Candida, более обычен рост в виде плотного складчатого штриха с вор­синчатым окаймлением. Край хорошо просматривается визуально при просвечивании пробирки или чашки, а также при наблюдении под малым увеличением микро­скопа.

Цвет штриха или колоний зависит от образования дрожжами некоторых пигментов. Наличие желтых, оран­жевых и красных пигментов, не проникающих в среду, характерно для Rhodotorula, Sporobolomyces и некоторых видов Cryptococcus. Образование кирпично-красного пиг­мента пульхерримина, диффундирующего в агар, специ­фично для Metschnikowia pulcherrima. Подавляющее боль­шинство видов дрожжей не синтезирует пигментов и фор­мирует колонии бесцветные или слегка кремового или коричневого оттенка при старении. Такого рода колонии характерны для дрожжей рода Saccharomyces.

Розоватая окраска штрихов у некоторых видов Han­senula и Pichia может быть связана с обильным спорообра­зованием, а колонии Nadsonia или Lipomyces становятся коричневыми  вплоть до шоколадного цвета при образова­нии аскоспор. Появление меланиноподобного пигмента, от которого штрих приобретает цвет от темно-зеленого до угольно-черного, характерно для Phaeococcus и дрожжеподобных грибов рода Aureobasidium, которые на ранних стадиях роста могут давать неокрашенные штрихи, не от­личимые от других дрожжей.

Для получения стандартного штриха используют две среды: сусло-агар концентрацией 8–10% СВ и глюкозопептонный агар с дрожжевым экстрактом. Посев произ­водят прямым штрихом в пробирки со скошенным ага­ром, в чашки Петри или маленькие колбочки.

Рост описывают через 6–8 суток инкубации при 25–30°С, а в случае медленно­растущих культур через 8 суток делают первое описание, а затем через 6 недель просматривают и описывают культуры вторично. Длительное выращивание производят при комнатной температуре — 17–18°С.

Для получения гигантской колонии используют сусло с желатиной (20%) или морфологический агар. Среды стери­лизуют в маленьких колбочках и закашивают. Посев произ­водят легким уколом иглы в центр скошенной поверхности.

Для фотографирования посев лучше делать в чашках Петри с толстым слоем агара. Выращивают в течение 30 су­ток при комнатной температуре.

Для замедления высыхания агара колбочки сверху обвязывают полиэтиленовым колпачком, а чашки Петри заклеивают сбоку лентой или пластырем.

При описании отмечают диаметр колонии и все при­знаки, указанные для штриха. Кроме того, при необходи­мости, обращают внимание на разжижение желатины.

При использовании в диагностических целях культуральных признаков дрожжей следует учитывать, что раз­ные штаммы одного вида на плотных средах могут давать различные формы роста: шероховатые (R – rough) и глад­кие (S – smooth), матовые (М – mat) и блестящие глян­цевые (Q – glossy).

7.2. РОСТ В ЖИДКИХ СРЕДАХ

Рост микроорганизмов в жидких питательных средах более однообразен и сопровождается помутнением среды, образованием пленки или осадка. Характеризуя рост микроорганизмов в жидкой среде, отмечают:

• степень помутнения – слабая, умеренная или сильная;
• особенности пленки – тонкая, плотная или рыхлая, гладкая или складчатая, опускающаяся или подни­мающаяся по стенкам пробирки;
• образование осадка – скудный он или обильный, плот­ный, рыхлый, слизистый или хлопьевидный.

Нередко рост микроорганизмов сопровождается появ­лением запаха, пигментацией среды, выделением газа. Последнее обнаруживают по образованию пены, пузырь­ков, а также с помощью поплавков.

Для описания характера роста микроорганизмов в жид­ких средах их выращивают на среде, обеспечивающей хо­роший рост.

При росте в жидких средах дрожжи вызывают помут­нение, образуют осадок, кольцо или разного характера пленки. Рост в виде пленки характеризует способность клеток объединяться в мицелиальные структуры. При образовании истинного мицелия пленка обычно толстая и плотная, но в старых культурах она может превращать­ся в слизистую массу. Раннее, через 1–2 дня, образование тонкой тусклой, иногда мелкоморщинистой и всползаю­щей по стенкам пробирки пленки обычно наблюдается у дрожжей с окисли­тельным типом энергетического мета­болизма.

Рост дрожжей в жидких средах наблюдают и описы­вают при использовании соло­дового сусла концентрацией 10–15% СВ или в жидкой глюкозопептонной среде с дрож­жевым экстрактом. Посев делают в пробирки или колбоч­ки Эрленмейера и инкубируют 4 недели при комнатной температуре – 17–18°С.