Аппаратура, материалы и реактивы:
♦ фотоэлектроколориметр;
♦ колбы конические вместимостью 50 см3;
♦ рН-метр;
♦ пипетки вместимостью 1 и 10 см3;
♦ колба мерная вместимостью 1 дм3;
♦ натрий пиросернистокислый, ч. д. а.;
♦ натрий молибденовокислый, ч. д. а.;
♦ фосфатный буфер с рН 7,2;
♦ натрий фосфорнокислый двухзамещенный 12-ти водный, ч. д. а.;
♦ натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-х водный, ч. д. а.
Приготовление рабочих растворов
Приготовление водного раствора пиросернистокислого натрия с массовой концентрацией 10 г/дм3.
10 гNa2S2O5растворяют в дистиллированной воде и количественно переводят дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 1 дм3, устанавливают температуру 20±1°С. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 1 дм3, колбу закрывают пробкой и содержимое колбы энергично перемешивают взбалтыванием.
Приготовление водного раствора молибденовокислого натрия с массовой концентрацией 20 г/дм3
20 гNa2МоO4 • 2Н2O растворяют в дистиллированной воде и количественно переводят дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 1 дм3, устанавливают температуру 20±1°С.
Объем раствора доводят дистиллированной водой до 1 дм3, колбу закрывают пробкой и содержимое колбы энергично перемешивают взбалтыванием.
Приготовление фосфатного буфера с рН 7,2
Приготовление раствора фосфорнокислого натрия с молярной концентрацией 0,5моль/дм3:
♦ двухзамещенного (Na2НРO4 • 12Н2O)
179 г двухзамещенного фосфорнокислого натрия взвешивают с точностью до 0,0001 г, растворяют в дистиллированной воде и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1 дм3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают (раствор 1).
♦ однозамещенного (NaН2РO4 • 2Н2O)
78 гсоли, отвешенной с точностью до 0,0001 г, аналогично растворяют в дистиллированной воде и доводят до метки в мерной колбе вместимостью 1 дм3 (раствор 2).
Далее путем смешивания 120 см3 раствора 1 и 50 см3 раствора 2 получают буферную смесь с рН 7,2.
Проверку рН смеси осуществляют с использованием рН-метра.
Подготовка образцов пива (сусла) для анализа
♦ Пиво освобождают от диоксида углерода (СО2).
♦ Мутное пиво (сусло) центрифугируют.
Проведение испытания
В коническую колбу вместимостью 50 см3 отмеривают пипетками 10 см3 пива (сусла), 1 см3 фосфатного буфера с рН 7,2, 1 см3 раствора пиросернистокислого натрия с массовой концентрацией 10 г/дм3, 1 см3 раствора молибденовокислого натрия с массовой концентрацией 20 г/дм3, смесь энергично перемешивают и оставляют в покое на 10 мин. Через 10 мин измеряют оптическую плотность раствора в кювете вместимостью 10 см3 на волне 400 нм против контроля, которым является смесь: 10 см3 пива (сусла) + 1 см3 фосфатного буфера с рН 7,2 + 1 см3 раствора пиросернистокислого натрия + 1 см3 дистиллированной воды.
Обработка результатов
Содержание в пиве (сусле) антоцианогенов (Ан) в мг/дм3 вычисляют по формуле:
ОП400 – 0,0320
Ан, мг/дм3 = --------------------- • 1000
4,563
где ОП400 - оптическая плотность раствора, измеренная в кювете вместимостью 10 см3 на волне 400 нм против контроля.
Вычисление производят с точностью до 0,01 мг с последующим округлением до 0,1 мг. Окончательный результат является средним арифметическим двух параллельных определений.