Для определения активности аминоацилтрансфераз, например, γ-глутамилтрансферазы в качестве субстрата часто используют глутатион. Для этого 0,5 мл молока в смеси с 0,053 М восстановленным глутатионом, 1,18 М гидроксиламином и 0,5 мл буфера выдерживают при 37 °С в течение 1 часа (рН 7,05). Оптическую плотность образовавшейся γ-глутамилгидроксамовой кислоты измеряют при 540 нм фото- или спектрофотометрически (Majumber G. C., Ganguli N. С).
При использовании в качестве субстрата 4 ммоль γ-глутамил-n-нитроанилида и в качестве акцептора γ-глутамила применяют 4 ммоль аминокислоту или пептид-глицил-глицин. Реакцию проводят при 37°С в буферном растворе (рН 8,0). За единицу активности фермента принимают образование 1 мкмоля гидроксамата или n-нитроанилида за 1 мин, измеренное спектрофотометрическим методом и при использовании градуировочной кривой (Baumrucker C. R., 1980).
Для определения активности аминотрансфераз в качестве субстрата используют различные аминокислоты. Так, для аспартат- и аланинаминотрансфераз используют соответственно аспарагиновую кислоту и аланин совместно с кетаглутаровой кислотой в фосфатном буфере при рН 7,45. В качестве цветного реактива применяют 0,02%-ный раствор (в 1 н. НС1) 2,4-динитрофенилгидразина, который при подщелачивании смеси реагентов с молоком превращается в гидразон. В смесь реагентов входят: 1 мл субстрата и 0,2 мл молока (эту смесь выдерживают 60 мин при 37°С) и колориметрируют при 520 нм. За единицу активности принимают – превращение 1 мг аминокислоты за 1 час при 37°С на 100 мл обезжиренного молока (Третевич В. Т., Жминка В. Я.)
В основу одного из методов положено определение суммарной оптической плотности динитрофенилгидразонов пировиноградной кислоты, являющейся продуктом реакции, и α-кетоглутаровой кислоты как исходного вещества реакции переаминирования (в случае аспартатаминотрансферазы, образующаяся щавелевоуксусная кислота предварительно переводится в пировиноградную). По величине оптической плотности с использованием градуировочной кривой определяют количество пировиноградной кислоты. За единицу активности аминотрансфераз принимают образование 1 мкг пировиноградной кислоты в условиях проводимой реакции (Асатиани В. С).
