Принцип метода

Изменение интенсивности окраски раствора полифенольных соединений в щелочной среде в присутствии железа лимонноаммиачного коричневого, водного 2С6Н5O7Fе х С6Н7O7NН4 • nН2O.

Аппаратура, материалы и реактивы:

♦   фотоэлектроколориметр (спектрофотометр);

♦   центрифуга;

♦   весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 200 г;

♦   цилиндр мерный вместимостью 1 дм3;

♦   колбы мерные вместимостью 25, 100 и 1000 см3;

♦   пипетки вместимостью 10 см3;

♦   колба коническая вместимостью 1000 см3;

♦   поликлар АТ (поливинилпирролидон с молекулярной массой 700 000);

♦   КМЦ (карбоксиметилцеллюлоза);

♦   ЕДТА (этилдиаминтетраацетатдинатриевая соль, хелакон) либо трилон Б;

♦   железо лимонноаммиачное коричневое, водное - цитрат коричневый;

♦   аммиак (раствор);

♦   ртуть уксуснокислая, ч. д. а.

Приготовление рабочих растворов

Приготовление реагента I

В коническую колбу вместимостью 1 дм3 помещают 10 г чистой соли КМЦ и 2 г ЕДТА, заливают примерно 800 см3 дистиллированной воды (теплой) и оставляют смесь на ночь (для набухания и растворения КМЦ). Затем содержимое конической колбы ко­личественно переводят дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 1 дм3 и объем раствора доводят дистиллированной водой до 1 дм3. Нерастворившиеся ко­мочки удаляют центрифугированием.

Приготовление реагента II

2,5 г железа лимонноаммиачного коричневого, водного растворяют в 100 см3 раствора уксуснокислой ртути с массовой концентрацией 0,1 г/100 см3.

Примечание. При отсутствии уксуснокислой ртути можно приготовить раствор железа лимонноаммиачного коричневого, водного в 100 см3 дистиллированной воды.

Приготовление реагента III

Раствор аммиака с массовой концентрацией 250 г/дм3 смешивают с двумя объемами дистиллированной воды.

Подготовка образцов пива для анализа

Пиво освобождают от диоксида углерода (СО2). Мутное пиво (сусло) центрифуги­руют.

Основное определение

В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят пипетками 10 см3 пива и 8 см3 реагента I и содержимое колбы энергично перемешивают. Затем в колбу добавляют 0,5 см3 реа­гента II и после перемешивания добавляют 0,5 см3 реагента III. Содержимое колбы снова перемешивают, объем раствора доводят дистиллированной водой до 25 см3 и оставляют в покое на 10 мин. После истечения 10 мин измеряют оптическую плотность раствора в кювете вместимостью 10 см3 на волне 600 нм против воды.

Контроль I

В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят пипетками 10 см3 пива и 8 см3 реагента I и содержимое колбы энергично перемешивают. Затем в колбу добавляют 0,5 см3 реа­гента III, раствор перемешивают, объем доводят дистиллированной водой до 25 см3, снова перемешивают и оставляют в покое на 10 мин. После истечения 10 мин измеря­ют оптическую плотность раствора в кювете вместимостью 10 см3 на волне 600 нм против дистиллированной воды.

Контроль II

В мерную колбу вместимостью 25 см3 вносят пипетками 10 см3 дистиллированной воды и 8 см3 реагента I и содержимое колбы энергично перемешивают. Затем в колбу добавляют 0,5 см3 реагента II и после энергичного перемешивания добавляют 0,5 см3 реагента III (раствора аммиака). Содержимое колбы снова перемешивают, объем ра­створа доводят дистиллированной водой до 25 см3, опять перемешивают и оставляют в покое на 10 мин. После истечения 10 мин измеряют оптическую плотность раствора в кювете вместимостью 10 см3 на волне 600 нм против дистиллированной воды.

Обработка результатов

Общее количество в пиве (сусле) полифенольных соединений (Пф) в мг/дм3 вычис­ляют по формуле:

Пф, мг/дм3 = ОП - (ОПконтрольI, + ОПконтрольII) = ОП х 820,

где

ОП – светопоглощение при длине волны 600 нм;

820 – коэффициент пересчета.

Вычисление производят с точностью до 0,01 мг с последующим округлением до 0,1 мг. Окончательный результат является средним арифметическим двух параллель­ных определений.